产品货号:
KD1160
中文名称:
YM4271感受态细胞
英文名称:
YM4271 Chemically Competent Cell
产品规格:
10×100μL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
保存:-80℃
产品储存:-80℃保存,6个月有效。
产品组成:
基因型:
MATa,ura3-52,his3-Δ200,ade2-101,ade5,lys2-801,leu2-3,112,trp1-901,tyr1-501,gal4Δ,gal80Δ,ade5::hisG
产品说明:
YM4271菌株,MATa型,可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株EGY48、Y187等通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为:trp1,leu2,ura,报告基因为:HIS3。可用于酵母双杂,酵母单杂或异源蛋白表达等试验。
使用方法:
1.取YM4271感受态细胞100μL于冰上融化,依次加入预冷的目的质粒2~5μg,Carrier DNA(95~100℃,5min,快速冰浴,重复一次)10μL,PEG/LiAc 500μL并吹打几次混匀,30℃水浴30min (15min时翻转6~8次混匀)。
2.将离心管置于42℃水浴15min(7.5min时翻转6~8次混匀)。
3.5000rpm离心40 s弃上清,ddH2O 400μL重悬,离心30s弃上清。
4.ddH2O 50μL重悬,涂板,29℃培养48-96h。
5.筛选培养基可选本公司SD系列产品,产品链接(http://www.Biorab.com/Column_Content.asp?Column_ID=48766)
注意事项:
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4.YM4271菌株对高温敏感,最适生长温度为27~30℃;高于31℃,生长速度和转化效率呈指数下降。
5.菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平板上的Adenine被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用,然而,有些菌株的ADE2基因被破坏,Adenine合成途径受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越慢,以转化涂板为例:涂YPDA平板29℃,48h培养可见直径1mm克隆;涂SD单缺平板29℃,48-60h培养可见直径1mm克隆,涂SD双缺平板29℃,60-80h培养可见直径1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培养可见直径1mm克隆。
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